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數(shù)字分光光度計使用方法步驟
更新時間:2018-03-15 點擊次數(shù):2334次
   數(shù)字分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。
  數(shù)字分光光度計原理
  數(shù)字分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
  單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關系為:A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc  式中:A 為吸光度;I。為入射的單色光強度;I 為透射的單色光強度;T 為物質的透射率;k 為摩爾吸收系數(shù);L 為被分析物質的光程,即比色皿的邊長;c為物質的濃度;
  物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數(shù)是該物質的物理常數(shù)。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區(qū),除某些物質對光有吸收外,很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標準品或對照品同時操作。
  數(shù)字分光光度計使用方法步驟
  1)預熱儀器。為使測定穩(wěn)定,將電源開關打開,使儀器預熱20min,為了防止光電管疲勞,不要連續(xù)光照。預熱儀器時和在不測定時應將比色皿暗箱蓋打開,使光路切斷。
  2)選定波長。根據(jù)要求,轉動波長調節(jié)器,使指針指示所需要的單色光波長。
  3)固定靈敏度檔。根據(jù)有色溶液對光的吸收情況,為使吸光度讀數(shù)為0.2-0.7,選擇合適的靈敏度。為此,旋動靈敏度檔,使其固定于某一檔,在實驗過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。
  4)調節(jié)“0”點。輕輕旋動調“0”電位器,使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時,比色皿暗箱蓋是打開的,光路被切斷,光電管不受光照)。
  5)調節(jié)T=。將盛蒸餾水(或空白溶液或純溶劑)的比色皿放入比色皿座架中的*格內,有色溶液放在其它格內,把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上,轉動光量調節(jié)器,使透光度T=,即表頭指針恰好指在T=處。
  6)測定。輕輕拉動比色皿座架拉桿,使有色溶液進入光路,此時表頭指針所示為該有色溶液的吸光度A。讀數(shù)后,打開比色皿暗箱蓋。
  7)關機。實驗完畢,切斷電源,數(shù)字分光光度計將比色皿取出洗凈,并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。
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